Schneller, amplifikationsfreier und sensitiver diagnostischer Test zur Einzelschritt‐Multiplexfluoreszenzdetektion von MicroRNA

Abstract Die Bedeutung der MicroRNA(miRNA)‐Dysregulierung für die Entwicklung und den Fortschritt von Krankheiten sowie die Entdeckung stabiler miRNA in peripherem Blut haben diese kurzen Nukleinsäuren zu Biomarkern der nächsten Generation gemacht. Hier präsentieren wir einen vollkommen homogenen Multiplex‐miRNA‐FRET‐Test, der sorgfältiges biophotonisches Design mit verschiedenen RNA‐Hybridisierungs‐ und Ligationsschritten kombiniert. Im Vergleich zum Stand der Technik in der miRNA‐Detektion bietet der Einzelschritt‐Einzeltemperatur‐ und amplifikationsfreie Assay eine einzigartige Kombination von Leistungsparametern. Präzise Multiplex‐Quantifizierung von miRNA‐20a, ‐20b und ‐21 in Konzentrationen zwischen 0.05 und 0.5 n M in einer einzigen 150‐μL‐Probe und Nachweisgrenzen zwischen 0.2 und 0.9 n M in 7.5‐μL‐Serumproben zeigen die Anwendbarkeit der Technologie sowohl für die Hochdurchsatzanalyse als auch die patientennahe klinische Diagnostik.